DELLA beloklary saklanýarösüşi sazlaýjyiçerki we daşarky signallara jogap hökmünde ösümlikleriň ösüşinde esasy rol oýnaýar. Transkripsiýa sazlaýjylary hökmünde DELLA-lar GRAS domenleri arkaly transkripsiýa faktorlaryna (TF) we giston H2A bilen baglanyşýarlar we höweslendirijiler üçin hereket edýärler. Soňky gözlegler, DELLA durnuklylygynyň terjimeden soň iki mehanizm bilen kadalaşýandygyny görkezdi: ösümlik gormonynyň täsiri bilen polýubikuitasiýagibberellin, olaryň çalt zaýalanmagyna we ýygnanmagyny artdyrýan kiçijik ubiquitine meňzeş üýtgediji (SUMO) bilen birleşmegine sebäp bolýar. Mundan başga-da, DELLA işjeňligi iki dürli glikozilasiýa mehanizmi bilen dinamiki tertipleşdirilýär: O-fukosilasiýa DELLA-TF täsirini güýçlendirýär, O bilen baglanyşykly N-asetilglukozamin (O-GlcNAc) modifikasiýasy DELLA-TF täsirini saklaýar. Şeýle-de bolsa, DELLA fosforilýasiýanyň roly düşnüksiz, sebäbi öňki barlaglar gapma-garşylykly netijeleri görkezdi, käbirleri fosforilasiýanyň DELLA zaýalanmagyny öňe sürýändigini ýa-da basyp ýatyrýandygyny, beýlekileriň bolsa fosforilýasiýanyň durnuklylygyna täsir etmeýändigini öňe sürýärler. Bu ýerde, köpçülikleýin spektrometriýa arkaly Arabidopsis talianasyndan arassalanan GA1-3 repressorynda (RGA), AtDELLA-da fosforilýasiýa ýerlerini kesgitleýäris we PolyS we PolyS / T sebitlerinde iki RGA peptidiniň fosforilýasiýasynyň H2A baglanyşygyny we maksatly höweslendirijiler bilen RGA birleşmesini ösdürmek arkaly RGA işjeňligini ýokarlandyrýandygyny görkezýäris. Fosforilýasiýa RGA-TF täsirine ýa-da RGA durnuklylygyna täsir etmedi. Biziň gözlegimiz, fosforilasiýanyň DELLA işjeňligini döredýän molekulýar mehanizmini açýar.
Köpçülikleýin spektrometrik derňewimiz, Pep1 bilen Pep2 ikisiniň hem GA ýetmezçilikli Ga1 fonunda RGA-da ýokary fosforilendigini ýüze çykardy. Bu gözlegden başga-da, fosfoproteomiki gözlegler RGA-da Pep1 fosforilýasiýasyny ýüze çykardy, ýöne onuň roly entek öwrenilmedi53,54,55. Munuň tersine, Pep2 fosforilýasiýasy öň beýan edilmedi, sebäbi bu peptidi diňe RGAGKG transgeni ulanyp tapyp bolýar. Pep1 fosforilýasiýasyny ýatyran m1A mutasiýa, ösümlikdäki RGA işjeňligini birneme peseldenem bolsa, RGA işjeňligini azaltmakda m2A bilen birleşdirilende goşmaça täsir etdi (Goşmaça 6-njy surat). Möhüm zat, GA1 bilen deňeşdirilende GA güýçlendirilen sly1 mutantda Pep1 fosforilýasiýasy ep-esli azaldy, bu GA-nyň RGA deposforilýasiýasyny öňe sürýändigini we işjeňligini peseldýändigini görkezýär. GA-nyň RGA fosforilýasiýasyny basyp ýatyrýan mehanizmi has köp derňewi talap edýär. Bir ähtimallyk, munuň näbelli belok kinazyny sazlamak arkaly gazanylmagydyr. Geçirilen gözlegler, CK1 belok kinaz EL1-iň aňladylyşynyň tüwi bilen GA tarapyndan kadalaşdyrylmaýandygyny görkezse-de, netijelerimiz Arabidopsis EL1 gomologynyň (AEL1-4) ýokary tertipli mutasiýalarynyň RGA fosforilýasiýasyny azaltmaýandygyny görkezýär. Netijelerimiz bilen ylalaşyp, ýaňy-ýakynda Arabidopsis AEL-den aşa aşa gysyjy çyzyklary we ael üç mutant ulanyp, fosfoproteomiki gözleg hiç bir DELLA belokyny bu kinazlaryň substraty hökmünde kesgitlemedi56. Golýazmany taýýarlanymyzda, bugdaýda (Triticum aestivum) GSK3 / SHAGGY meňzeş kinase kodlaýan gen GSK3, GSK3 tarapyndan Rht-B1b fosforilýasiýasynyň tassyklanmadygy habar berildi. GSK3 bar bolan vitro ferment reaksiýalary, soň bolsa köpçülik spektrometriýa derňewi, Rht-B1b DELLA we GRAS domenleriniň arasynda ýerleşýän üç sany fosforilýasiýa meýdançasyny ýüze çykardy (Goşmaça 3-nji surat). Üç fosforilýasiýa meýdançasyndaky alanin çalşygy, transgen bugdaýda Rht-B1b işjeňliginiň peselmegine sebäp boldy, Pep2 RGA-daky alanin çalşygynyň RGA işjeňligini peseldendigi baradaky netijelerimize laýyk gelýär. Şeýle-de bolsa, in vitro belogyň zaýalanmagy, fosforilýasiýanyň Rht-B1b57-ni hem durnuklaşdyryp biljekdigini görkezdi. Bu, Pep2 RGA-daky alanin çalşygynyň ösümlikdäki durnuklylygyny üýtgetmeýändigini görkezýän netijelerimizden tapawutlanýar. Bugdaýdaky GSK3, Arabidopsis 57-de brassinosteroid-duýgur belok 2 (BIN2) ortologydyr. BIN2 BR signalynyň otrisatel kadalaşdyryjysydyr, BR bolsa BIN2 zaýalanmagyna sebäp bolup, signalizasiýa ýoluny işjeňleşdirýär 58.
Quhli mukdar maglumatlary Excel-iň kömegi bilen statistik taýdan derňeldi we Talyplaryň synagyndan peýdalanyp düýpli tapawutlar kesgitlenildi. Mysal ölçegini öňünden kesgitlemek üçin hiç bir statistik usul ulanylmady. Derňewden hiç hili maglumat aýrylmady; tejribe tötänleýin bolmady; gözlegçiler synag we netijelere baha bermek wagtynda bölünişikden habarlydylar. Nusga ululyklary şekil rowaýatlarynda we çig maglumatlar faýllarynda berilýär.
Iş wagty: 15-2025-nji aprel