Ösümlik we patogen materiallary
Mekge öwrülişigi (SCP) diýlip atlandyrylýan mekgejöwen birleşigini Illinoýs uniwersitetinde (häzirki UC Deýwisde) doktor Pat Braun üpjün etdi.Ozal beýan edilipdi we ABŞ-nyň şertlerinde ösümlikleriň ösmegini we ösmegini aňsatlaşdyrmak üçin fotoperiod-duýgurlyga we kiçi boýlara öwrülen dürli çyzyklaryň ýygyndysydyr.Bu gözlegde bu ilatdan 510 setir ulanyldy, erbet gögermek we beýleki hil gözegçiligi sebäpli üç häsiýetiň derňewinde setirleriň hemmesi ulanylmady.Netijede, 345 setirden alnan maglumatlar, çitiniň jogabyny seljermek üçin, flg22 jogap üçin 472 setir we TLS garşylygy üçin 456 setir ulanyldy.B. cookeiştammy LSLP18 Arkanzas uniwersitetinde doktor Burt Bluhmdan alyndy.
MAMP jogap ölçegi
Bu gözlegde flg22, (Genscript katalogy # RP19986) we çitin iki dürli MAMP ulanyldy.Sorgum ösümlikleri teplisada toprak bilen doldurylan kwartiralara (33% Güneş Redi-Earth Pro Growing Mix) ösdürilip ýetişdirildi.Ösümlikler ýygnan güni goşmaça ýaprak çyglylygynyň öňüni almak üçin nusga ýygnamakdan bir gün öň suwaryldy.
Setirler tötänleýin düzüldi we maddy-tehniki sebäplere görä 60 setirden ybarat toparlara ekildi.Her setir üçin her setirde iki tohum bilen üç sany "küýze" ekildi.Ondan soňky partiýalar, öňki ilat gaýtadan işlenilen badyna, tutuş ilata baha berilýänçä ekildi.Iki ylgawyň hersinde genotipleri üýtgedilen iki MAMP üçin iki synag synag geçirildi.
ROS barlaglary öň beýan edilişi ýaly geçirildi.Gysgaça, her setir üçin 3 dürli küýzede alty tohum ekildi.Alnan nahallardan üçüsi birmeňzeşlige esaslanyp saýlandy.Adaty bolmadyk ýa-da ep-esli uzyn ýa-da gysga bolan nahallar ulanylmady.Diametri 3 mm bolan dört ýaprakly disk, 15 günlük üç sany mekgejöwen ösümliginiň 4-nji ýapragynyň iň giň böleginden çykaryldy.Iki ösümlikden ýaprak başyna bir disk we bir ösümlikden iki disk, ikinji disk bolsa suw gözegçiligine öwrülýär (aşaga serediň).Diskler gara 96 guýy tabakda 50 µl H20-de aýratynlykda ýüzüpdir, ýagtylyga duçar bolmazlygy üçin alýumin möhür bilen möhürlenipdir we bir gije otag temperaturasynda saklanypdyr.Ertesi gün irden 2 mg / ml himiluminesent zondy L-012 (Wako, katalog # 120-04891), 2 mg / ml atly peroksidaza (VI görnüş A, Sigma-Aldrih, katalog # P6782) ulanylyp, reaksiýa çözgüdi edildi. 100 mg / ml Çitin ýa-da 2 μM Flg22.Dört guýynyň üçüsine bu reaksiýa ergininiň 50 µl goşuldy.Dördünji guýy, MAMP-den başga reaksiýa çözgüdi goşulan masgara gözegçilik boldy.Her tabakda diňe suwy öz içine alýan dört boş guýy hem bardy.
Reaksiýa çözgüdi goşulandan soň, lýumensensiýa SynergyTM 2 köp kesgitleýji mikroplat okyjy (BioTek) bilen her 2 minutda 1 sagatda ölçenildi.Tabak okaýjy, bu 1 sagadyň dowamynda her 2 minutda lýumensensiýa ölçeglerini alýar.Her 31 guýynyň bahasyny bermek üçin 31 okalyşyň jemi hasaplandy.Her genotip üçin MAMP jogabynyň takmynan bahasy (üç synag guýusynyň ortaça lýumensensiýa bahasy - masgaralaýjy guýynyň bahasy) - ortaça boş guýynyň bahasy hökmünde hasaplandy.Boş guýy bahalary yzygiderli nola ýakynlaşýardy.
Leafaprak diskleriNikotiana benthamiana, ýokary gözegçilik maksatly her 96 guýy tabakda gözegçilik hökmünde bir ýokary sesli mekgejöwen çyzygy (SC0003) we bir pes sesli mekgejöwen çyzygy (PI 6069) hem girizildi.
B. cookeiinokulumy taýýarlamak we sanjym etmek
B. cookeiinokulum öň beýan edilişi ýaly taýýarlandy.Gysgaça, mekgejöwen däneleri üç gün suwa batyryldy, ýuwuldy, 1L konus çüýşelerine atyldy we 15psi we 121 ° C-de bir sagat awtoklaw edildi.Däneler soňra täze bir medeniýetden takmynan 5 ml ýasalan mikeliýa bilen sanjym edildiB. cookeiLSLP18 izolýasiýa edýär we otag temperaturasynda 2 hepdeläp, çüýşeleri her 3 günden bir gezek silkýär.2 hepdeden soň, kömelek mekgejöwen däneleri howada guradyldy we meýdan sanjymyna çenli 4 ° C derejesinde saklandy.Şol inokulum tutuş synag üçin ulanyldy we her ýyl täzelendi.Sanjym üçin 4–5 hepdelik mekgejöwen ösümliklerine 6-10 sany däneli däne ýerleşdirildi.Bu kömeleklerden öndürilen sporalar, bir hepdäniň içinde ýaş mekgejöwen ösümliklerinde ýokaşma başlady.
Tohum taýýarlamak
Ekin meýdanyna ekilmezden ozal, 1% Spirato 480 FS fungisid, 4% Sebring 480 FS fungisid, 3% Sorpro 940 ES tohum saklaýjy bolan fungisid, insektisid we has ygtybarly garyndy bilen bejerildi.Soňra tohumlar tohumyň töwereginde bu garyndynyň inçe örtügini üpjün edip, 3 gün howa bilen guradyldy.Has ygtybarly, gerbisid Dual Magnum-yň ýüze çykma bejergisi hökmünde ulanylmagyna rugsat berdi.
Maksatly ýaprak tegmile garşylygyna baha bermek
SCP 2017-nji ýylyň 14-15-nji iýunynda we 2018-nji ýylyň 20-nji iýunynda Klaýton şäherindäki Merkezi ekin gözleg merkezinde we her ýagdaýda iki synag synag nusgasy bilen tötänleýin doly blok dizaýnynda ekildi.Synaglar, her meýdana 10 tohum ulanyp, 0,9 m hatar ini bolan 1,8 m bir hatarda ekildi.Gyrasy täsirleriň öňüni almak üçin her synagyň daş-töwereginde iki sany serhet hatary oturdyldy.Synaglar 2017-nji ýylyň 20-nji iýulynda we 2018-nji ýylyň 20-nji iýulynda sanjym edildi, şonda mekgejöwen ösümlikleri 3-nji tapgyra gadam basdy. Bahalar bir-dokuz terezide alyndy, bu ýerde keseliň alamatlaryny görkezmeýän ösümlikler dokuz we doly hasaplandy ölen ösümlikler bir hökmünde hasaba alyndy.Iki reýting 2017-nji ýylda we her ýyl sanjymdan iki hepde soň 2018-nji ýylda dört gezek okaldy.sAUDPC (keseliň ösmeginiň egrisi boýunça standartlaşdyrylan meýdan) öň beýan edilişi ýaly hasaplandy.
Iş wagty: Apr-01-2021