Ösümlik we kesel dörediji materiallar
Illinoýs uniwersitetinde (häzirki wagtda UC Dewisde) doktor Pat Braun tarapyndan sorgum konwersiýa populýasiýasy (SCP) diýlip atlandyrylýan sorgum assosiasiýasynyň kartalaşdyryş populýasiýasy hödürlendi. Ol öň beýan edilipdi we ABŞ-nyň gurşawynda ösümlikleriň ösüşini we ösüşine ýardam bermek üçin fotoperioda duýgurlyga we kiçi boýa öwrülen dürli liniýalaryň toplumydyr. Bu gözlegde bu populýasiýadan 510 liniýa ulanyldy, ýöne ýaramaz çişme we beýleki hil gözegçiligi meseleleri sebäpli, üç alamatyň hemmesiniň seljermesinde ulanylmady. Ahyrsoňy 345 liniýadan alnan maglumatlar hitin jogabyny seljermek üçin, 472 liniýa flg22 jogaby üçin we 456 liniýa TLS garşylygy üçin ulanyldy.B. peçenýeLSLP18 ştammy Arkanzas uniwersitetinde doktor Burt Blumdan alyndy.
MAMP jogabynyň ölçegi
Bu gözlegde iki dürli MAMP flg22 (Genscript katalogy # RP19986) we hitin ulanyldy. Sorghum ösümlikleri ýyladyşhanada toprak (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) bilen doldurylan tekizliklere goýlan goýmalarda ösdürilip ýetişdirildi. Ýygnalýan günde ýapraklaryň artykmaç çyglylygynyň öňüni almak üçin ösümlikler nusga ýygnamazdan bir gün öň suwaryldy.
Setirler tesadüfi saýlanyldy we logistika sebäpleri üçin 60 setirden ybarat toparlarda ekildi. Her setir üçin her setirde iki tohum bolan üç "gabyk" ekildi. Soňky setirler öňki setir işlenip gutarylandan soň, tutuş populýasiýa baha berilýänçä ekildi. Iki setirde hem genotipler gaýtadan tesadüfi saýlanan MAMP-ler üçin iki synag synagy geçirildi.
ROS synaglary öň beýan edilişi ýaly geçirildi. Gysgaça aýdylanda, her setir üçin 3 dürli küýzede alty tohum ekildi. Netijede dörän nahallardan üçüsi birmeňzeşlige esaslanyp saýlandy. Adaty bolmadyk ýa-da köpüsinden has uzyn ýa-da gysga nahallar ulanylmady. Üç dürli 15 günlük sorghum ösümliginiň 4-nji ýapragynyň iň giň böleginden diametri 3 mm bolan dört ýaprak diski aýryldy. Iki ösümligiň her ýapragyna bir disk we bir ösümligiň iki diski, ikinji disk suwuň gözegçiligi boldy (aşakda serediň). Diskler gara 96 guýulyk tarelkada 50 µl H20-da aýratynlykda ýüzdürildi, ýagtylyga düşmezlik üçin alýumin möhür bilen ýapyldy we gije otagyň temperaturasynda saklandy. Ertesi gün irden 2 mg/ml himiluminescent zond L-012 (Wako, katalog # 120-04891), 2 mg/ml hren peroksidaza (VI-A görnüşi, Sigma-Aldrich, katalog # P6782) we 100 mg/ml Hitin ýa-da 2 μM Flg22 ulanylyp reaksiýa ergini taýýarlanyldy. Bu reaksiýa erginiň 50 µl-i dört guýunyň üçüsine goşuldy. Dördünji guýu MAMP-dan başga reaksiýa ergini goşulan synag gözegçilik guýusydy. Her bir tarelka diňe suw saklaýan dört boş guýu hem goşuldy.
Reaksiýa ergini goşulandan soň, lüminesensiýa SynergyTM 2 köp anyklaýyşly mikroplastinka okaýjysy (BioTek) arkaly her 2 minutda 1 sagatlap ölçeldi. Plastinka okaýjysy bu 1 sagadyň dowamynda her 2 minutda lüminesensiýa ölçeglerini geçirýär. Her guýu üçin gymmaty bermek üçin ähli 31 okaýyşyň jemi hasaplanyldy. Her genotip üçin MAMP jogabynyň çaklanylýan gymmaty (üç synag guýusynyň ortaça lüminesensiýa gymmaty - nusga guýusynyň gymmaty) - ortaça boş guýu gymmatyndan aýryp hasaplandy. Boş guýularyň gymmatlary yzygiderli nola golaýdy.
Ýaprak diskleriniňNikotiana benthamiana, hil gözegçiligi maksatlary üçin her 96 guýulyk plastinkada gözegçilik hökmünde bir ýokary derejede jogapkärli sorghum liniýasy (SC0003) we bir pes derejede jogapkärli sorghum liniýasy (PI 6069) hem goşuldy.
B. peçenýeinokulýaty taýýarlamak we inokulýasiýa
B. peçenýeinokulum öň beýan edilişi ýaly taýýarlanyldy. Gysgaça aýdylanda, sorghum däneleri üç günläp suwda çümdürildi, ýuwuldy, 1 litrlik konus şekilli kolbalara guýuldy we 15psi we 121 °C temperaturada bir sagatlap awtoklawda saklandy. Soňra däneler täze medeniýetden takmynan 5 ml maserasiýa edilen miseliýa bilen inokuasiýa edildi.B. peçenýeLSLP18 izolýatlary çykarylýar we otagyň temperaturasynda 2 hepde goýlup, her 3 günde bir gezek kolbalar çaýkalýar. 2 hepdeden soň, kömelek bilen zyýan çeken sorghum däneleri howada guradyldy we soňra meýdana sanjym edilýänçä 4 °C-de saklandy. Şol bir sanjym tutuş synag üçin ulanyldy we her ýyl täzelendi. Sanjym üçin 4-5 hepdelik sorghum ösümlikleriniň içine 6-10 zyýan çeken däne goýuldy. Bu kömeleklerden öndürilen sporalar bir hepde içinde ýaş sorghum ösümliklerinde infeksiýany başlady.
Tohum taýýarlamak
Meýdançada ekmezden öň, sorghum tohumy takmynan 1% Spirato 480 FS fungisidi, 4% Sebring 480 FS fungisidi, 3% Sorpro 940 ES tohum howpsuzlaýjysyny öz içine alýan fungisidi, insektisid we howpsuz garyndysy bilen işlenildi. Soňra tohumlar 3 günläp howada guradyldy, bu bolsa tohumlaryň daşyna bu garyndynyň inçe örtügini üpjün etdi. Howpsuz garyndy, gerbisidi Dual Magnum-y ösümlikleriň peýda bolmagyndan öň bejeriş hökmünde ulanmaga mümkinçilik berdi.
Nyşana alnan ýaprak nokatlarynyň garşylygynyň bahalandyrylmagy
SCP 2017-nji ýylyň 14-15-nji iýunynda we 2018-nji ýylyň 20-nji iýunynda Demirgazyk Karolina ştatynyň Kleýton şäherindäki Merkezi ekinleri öwrenmek stansiýasynda her bir ýagdaýda iki synag gaýtalanmasy bilen tötänleýin saýlanan doly blok dizaýnynda ekildi. Synaglar her bir meýdançada 10 tohum ulanylyp, 0,9 m hatar giňliginde 1,8 m ýeke hatarlara ekildi. Gyra täsirleriniň öňüni almak üçin her bir synagyň daş-töweregine iki serhet hatary ekildi. Synaglar 2017-nji ýylyň 20-nji iýulynda we 2018-nji ýylyň 20-nji iýulynda sanjym edildi, şol wagt sorghum ösümlikleri 3-nji ösüş tapgyryndady. Bahalar birden dokuza çenli şkala boýunça alyndy, bu ýerde kesel alamatlaryny görkezmeýän ösümlikler dokuz, doly ölen ösümlikler bolsa bir bal bilen bahalandyryldy. 2017-nji ýylda iki baha, 2018-nji ýylda bolsa her ýyl sanjymdan iki hepde soň başlap dört sany okama geçirildi. sAUDPC (kesel ösüş egrisi astynda standartlaşdyrylan meýdan) öň beýan edilişi ýaly hasaplandy.
Ýerleşdirilen wagty: 2021-nji ýylyň 1-nji apreli