DELLA beloklary konserwirlenen ussatdyrösüş düzgünleşdirijileriiçki we daşky gurşaw alamatlaryna jogap hökmünde ösümlikleriň ösüşini gözegçilikde saklamakda esasy rol oýnaýanlar. DELLA transkripsiýa düzgünleşdirijisi hökmünde hereket edýär we transkripsiýa faktorlaryna (TF) we GRAS domeni arkaly giston H2A baglanyp, promotorlary nyşana almak üçin işe alynýar. Soňky barlaglar DELLA durnuklylygynyň iki mehanizm arkaly terjimeden soň düzgünleşdirilýändigini görkezdi: fitohormon gibberellin tarapyndan induksiýa edilen poliubiquitinasiýa, bu bolsa onuň çalt dargamagyna getirýär we onuň toplanmagyny artdyrmak üçin kiçi ubiquitin ýaly modifikatorlaryň (SUMO) konýugasiýa edilmegi. Mundan başga-da, DELLA işjeňligi iki dürli glikozilasiýa arkaly dinamiki taýdan düzgünleşdirilýär: DELLA-TF özara täsiri O-fukozilasiýa bilen güýçlenýär, ýöne O bilen baglanyşykly N-asetilglukozamin (O-GlcNAc) modifikasiýa bilen basylyp saklanýar. Şeýle-de bolsa, DELLA fosforilasiýasynyň roly belli däl, sebäbi öňki barlaglar gapma-garşy netijeleri görkezdi, fosforilasiýanyň DELL dargamagyny höweslendirýändigini ýa-da azaldýandygyny görkezýänlerden başlap, fosforilasiýanyň onuň durnuklylygyna täsir etmeýändigini görkezýän beýleki barlaglara çenli. Bu ýerde biz REPRESSOR-da fosforilasiýa ýerlerini kesgitleýäris.ga1-3(RGA, AtDELLA) Arabidopsis thaliana-dan massa spektrometriýa seljermesi arkaly arassalanan we PolyS we PolyS/T sebitlerinde iki RGA peptidiniň fosforlaşmasynyň H2A baglanyşyny we RGA işjeňligini ýokarlandyrýandygyny görkezýär. RGA-nyň nyşana promotorlar bilen baglanyşygy. Belli bir zat, fosforlaşma RGA-TF özara täsirlerine ýa-da RGA durnuklylygyna täsir etmeýär. Biziň gözlegimiz fosforlaşmanyň DELLA işjeňligini nähili molekulýar mehanizm arkaly döredýändigini açyp görkezýär.
DELLA funksiýasyny düzgünleşdirmekde fosforilleşdirmegiň roluny düşündirmek üçin, DELLA fosforilleşdirme ýerlerini in vivo kesgitlemek we ösümliklerde funksional analizleri geçirmek möhümdir. Ösümlik ekstraktlaryny affinlik arassalamak we soňra MS/MS analizini geçirmek arkaly biz RGA-da birnäçe fosfositleri anykladyk. GA ýetmezçiligi şertlerinde RHA fosforilleşdirmesi artýar, ýöne fosforilleşdirme onuň durnuklylygyna täsir etmeýär. Iň esasysy, co-IP we ChIP-qPCR analizleri RGA-nyň PolyS/T sebitinde fosforilleşdirmegiň onuň H2A bilen özara täsirini we nyşana promotorlar bilen baglanyşygyny güýçlendirýändigini, fosforilleşdirmegiň RGA funksiýasyny nähili döredýändiginiň mehanizmini açyp görkezýändigini görkezdi.
RGA, LHR1 altdomeniň TF bilen özara täsiri arkaly hromatini nyşana almak üçin işe alynýar we soňra PolyS/T sebiti we PFYRE altdomeni arkaly H2A bilen baglanyşýar we RGA-ny durnuklaşdyrmak üçin H2A-RGA-TF toplumyny emele getirýär. DELLA domeni bilen GRAS domeniniň arasyndaky PolyS/T sebitinde Pep 2-niň näbelli kinaza tarapyndan fosforlaşmasy RGA-H2A baglanyşyny güýçlendirýär. rgam2A mutant belogy RGA fosforlaşmasyny ýok edýär we H2A baglanyşyna päsgel bermek üçin başga bir belogyň konformasiýasyny kabul edýär. Bu bolsa wagtlaýyn TF-rgam2A özara täsirleriniň durnuksyzlaşmagyna we rgam2A-nyň nyşana hromatinden aýrylmagyna getirýär. Bu surat diňe RGA arkaly transkripsiýa repressiýasyny görkezýär. RGA arkaly transkripsiýa aktiwleşmesi üçin meňzeş nusgany beýan edip bolýar, ýöne H2A-RGA-TF toplumy nyşana gen transkripsiýasyny höweslendirer we rgam2A-nyň defosforlaşmasy transkripsiýany peselder. Surat Huang we beýlekilerden üýtgedildi.21.
Ähli mukdary maglumatlar Excel ulanyp statistik taýdan seljerildi we Studentiň t testi arkaly möhüm tapawutlar kesgitlenildi. Nusganyň möçberini öňünden kesgitlemek üçin hiç hili statistik usullar ulanylmady. Hiç hili maglumat seljermeden çykarylmady; tejribe tötänleýin saýlanmady; barlagçylar tejribe wagtynda maglumatlaryň paýlanyşyna we netijeleriň bahalandyrylmagyna göz ýetirmediler. Nusganyň möçberi şekil legendasy we çeşme maglumat faýlynda görkezilýär.
Okuw dizaýny barada has giňişleýin maglumat üçin şu makala bilen baglanyşykly Tebigy Portfolio Hasabatynyň Gysgaça mazmunyna serediň.
Mass-spektrometriýa proteomikasynyň maglumatlary PXD046004 maglumat toplumy identifikatory bolan PRIDE66 hyzmatdaş repozitoriýasy arkaly ProteomeXchange konsorsiumyna goşuldy. Bu gözlegiň dowamynda alnan ähli beýleki maglumatlar Goşmaça Maglumatlarda, Goşmaça Maglumat Faýllarynda we Çig Maglumat Faýllarynda görkezilýär. Çeşme maglumatlary bu makala üçin berilýär.
Ýerleşdirilen wagty: 2024-nji ýylyň 8-nji noýabry