Sintetiki pestisidleriň giňden ulanylmagy çydamly organizmleriň döremegi, daşky gurşawyň zaýalanmagy we adamyň saglygyna zyýan bermek ýaly köp problemalara sebäp boldy. Şonuň üçin täze mikrobpestisidleradam saglygy üçin howpsuz we daşky gurşaw zerur. Bu gözlegde, çybyn (Culex quinquefasciatus) we termit (Odontotermes obesus) liçinkalaryna zäherliligini bahalandyrmak üçin Enterobacter cloacae SJ2 tarapyndan öndürilen rhamnolipid biosurfaktant ulanyldy. Netijeler bejergileriň arasynda doza bagly ölüm derejesiniň bardygyny görkezdi. Termit we çybyn gurçuk biosurfaktantlary üçin 48 sagatda LC50 (50% öldüriji konsentrasiýa) bahasy çyzykly regressiýa egri egri usuly bilen kesgitlenildi. Netijeler, biosurfaktantyň larwisid we antitermit işjeňliginiň 48 sagatlyk LC50 bahalarynyň (26.40 mg / L (aralyk 25.40 bilen 27.57 aralygy) we 33.43 mg / L (aralyk 31.09 bilen 35.68 aralygy) bolandygyny görkezdi. Gistopatologiki gözden geçirilişe görä, biosurfaktantlar bilen bejermek liçinkalaryň we termitleriň organelle dokumalaryna uly zeper ýetirdi. Bu gözlegiň netijeleri, Enterobacter cloacae SJ2 tarapyndan öndürilen mikrob biosurfaktantynyň Cx gözegçiligi üçin ajaýyp we potensial täsirli guraldygyny görkezýär. quinquefasciatus we O. obesus.
Tropiki ýurtlarda çybyn bilen baglanyşykly köp sanly kesel bar. Çybyn bilen baglanyşykly keselleriň ähmiýeti giňden ýaýrandyr. Gyzzyrma sebäpli her ýyl 400,000-den gowrak adam ölýär we käbir iri şäherlerde dengiz, sary gyzzyrma, çikungunýa we Zika ýaly agyr keselleriň epidemiýasy başdan geçirilýär.2 Wektor bilen baglanyşykly keseller dünýädäki alty ýokanç keseliň biri bilen baglanyşyklydyr, çybynlar iň köp sebäp bolýar möhüm ýagdaýlar3, 4. Culex, Anopheles we Aedes, köplenç kesel ýokaşmagy bilen baglanyşykly üç sany çybyn görnüşidir5. Deng gyzzyrmasynyň ýaýramagy, Aedes aegypti çybynynyň ýokaşmagy, soňky on ýylda köpeldi we ilatyň saglygyna ep-esli howp salýar4,7,8. Bütindünýä saglygy goraýyş guramasynyň (BSGG) hasabatyna görä, dünýä ilatynyň 40% -den gowragy dengiz gyzzyrma howpy astyndadyr, her ýylda 100-den gowrak ýurtda 50-100 million täze kesel ýüze çykýar9,10,11. Denge gyzzyrmasy, tutuş dünýäde 12,13,14 köpelmegi sebäpli ilatyň saglygynyň esasy meselesine öwrüldi. Adatça Afrika Anopheles çybynlary diýlip atlandyrylýan Anopheles gambiae, tropiki we subtropiki sebitlerde adam ysytma keseliniň iň möhüm wektorydyr15. Günbatar Nil wirusy, Sent-Luis ensefalit, ýapon ensefalit we atlaryň we guşlaryň wirus ýokançlyklary köplenç umumy öý çybynlary diýlip atlandyrylýan Culex çybynlary tarapyndan ýokaşýar. Mundan başga-da, bakteriýa we parazit kesellerini göterijiler16. Dünýäde termitleriň 3000-den gowrak görnüşi bar we olar 150 million ýyldan gowrak wagt bäri bar17. Zyýan berijileriň köpüsi toprakda ýaşaýar we sellýulozany öz içine alýan agaç we agaç önümleri bilen iýmitlenýärler. Hindi termit Odontotermes semizligi möhüm ekinlere we ekiş agaçlaryna uly zyýan ýetirýän möhüm zyýan berijidir18. Oba hojalygynda dürli döwürlerde termit infestasiýalary dürli ekinlere, agaç görnüşlerine we gurluşyk materiallaryna ägirt uly ykdysady zyýan ýetirip biler. Termitler adam saglygyna kynçylyk döredip biler19.
Häzirki zaman derman we oba hojalygyndaky mikroorganizmlerden we zyýankeşlerden garşylyk meselesi çylşyrymly 20,21. Şol sebäpli iki kompaniýa hem tygşytly täze mikroblara we howpsuz biopestisidlere gözlemeli. Sintetiki pestisidler indi bar we ýokançdygy we maksatly däl peýdaly mör-möjekleri ýok edýändigi görkezildi22. Soňky ýyllarda biosurfaktantlar boýunça gözlegler dürli pudaklarda ulanylmagy sebäpli giňeldi. Biosurfaktantlar oba hojalygynda, topragy düzetmekde, nebit çykarmakda, bakteriýalarda we mör-möjekleri ýok etmekde we azyk önümçiliginde örän peýdaly we möhümdir23,24. Biosurfaktantlar ýa-da mikrob surfaktantlary, kenarýaka ýaşaýyş ýerlerinde we nebit bilen hapalanan ýerlerde bakteriýalar, hamyrmalar we kömelekler ýaly mikroorganizmler tarapyndan öndürilýän biosurfaktant himiki maddalar25,26. Himiki taýdan alnan surfaktantlar we biosurfaktantlar tebigy gurşawdan gönüden-göni alynýan iki görnüşdir27. Deňiz ýaşaýyş ýerlerinden dürli biosurfaktantlar alynýar28,29. Şonuň üçin alymlar tebigy bakteriýalara esaslanýan biosurfaktantlary öndürmek üçin täze tehnologiýalary gözleýärler30,31. Şeýle gözleglerde gazanylan üstünlikler bu biologiki birleşmeleriň daşky gurşawy goramakdaky ähmiýetini görkezýär32. Bacillus, Pseudomonas, Rodococcus, Alcaligenes, Corynebacterium we bu bakteriýa görnüşleri gowy öwrenilen wekiller23,33.
Programmalaryň giň toplumy bilen biosurfaktantlaryň köp görnüşi bar34. Bu birleşmeleriň ep-esli artykmaçlygy, olaryň käbiriniň antibakterial, larwisid we insektisid işjeňliginiň bolmagydyr. Bu olaryň oba hojalygy, himiýa, derman we kosmetika pudaklarynda ulanylyp bilinjekdigini aňladýar 35,36,37,38. Biosurfaktantlar, adatça, biodegrirlenip bilýän we ekologiýa taýdan peýdaly bolany üçin, ekinleri goramak üçin zyýankeşleri dolandyrmagyň toplumlaýyn maksatnamalarynda ulanylýar39. Şeýlelik bilen, Enterobacter cloacae SJ2 tarapyndan öndürilen mikrob biosurfaktantlarynyň liçisid we antitermit işjeňligi barada esasy bilimler alyndy. Ramnolipid biosurfaktantlarynyň dürli konsentrasiýalaryna sezewar bolanymyzda ölüm we gistologiki üýtgemeleri gözden geçirdik. Mundan başga-da, mikroelga, dafniýa we balyk üçin ýiti zäherliligi kesgitlemek üçin giňden ulanylýan mukdar gurluşy-işjeňlik (QSAR) kompýuter programmasy Ekologiki gurluş-işjeňlik (ECOSAR) baha berdik.
Bu gözlegde, 30-dan 50 mg / ml çenli (5 mg / ml aralykda) dürli konsentrasiýalarda arassalanan biosurfaktantlaryň antitermit işjeňligi (zäherliligi) hindi termitlerine, O. obesus we dördünji görnüşlere garşy synag edildi. Instarlaryň liçinkalary Cx. Çybynlaryň liçinkalary quinquefasciatus. Biosurfaktant LC50 konsentrasiýalary O. obesus we Cx-e garşy 48 sagadyň dowamynda. C. solanacearum. Çybynlaryň liçinkalary çyzykly regressiýa egri egri usuly bilen kesgitlenildi. Netijeler biosurfaktant konsentrasiýasynyň ýokarlanmagy bilen termit ölüminiň ýokarlanandygyny görkezdi. Netijeler, biosurfaktantyň 26.49 mg / L (25.40 - 27.57) we 33,43 mg / 48 sagatlyk LC50 bahasy (95% CI) bilen, larisid işjeňliginiň (1-nji surat) we termite garşy işjeňliginiň (2-nji surat) bardygyny görkezdi. l (31.09-dan 35.68-nji surat) degişlilikde (1-nji tablisa). Uteiti zäherlilik nukdaýnazaryndan (48 sagat) biosurfaktant synag edilen organizmler üçin “zyýanly” toparlara bölünýär. Bu gözlegde öndürilen biosurfaktant, täsir edenden 24-48 sagadyň dowamynda 100% ölüm bilen ajaýyp liçinkalar işjeňligini görkezdi.
Liçinkalar işjeňligi üçin LC50 bahasyny hasaplaň. Çyzykly regressiýa egri egri (gaty çyzyk) we otnositel ölüm üçin 95% ynam aralygy (kölegeli meýdan).
Termite garşy işjeňlik üçin LC50 bahasyny hasaplaň. Çyzykly regressiýa egri egri (gaty çyzyk) we otnositel ölüm üçin 95% ynam aralygy (kölegeli meýdan).
Synagyň ahyrynda mikroskop astynda morfologik üýtgeşmeler we anomaliýalar ýüze çykdy. Gözegçilikde we 40x ulalanda bejergi toparlarynda morfologiki üýtgemeler hasaba alyndy. 3-nji suratda görkezilişi ýaly, biosurfaktantlar bilen bejerilen liçinkalaryň köpüsinde ösüşiň bozulmagy ýüze çykdy. 3a suratda adaty Cx görkezilýär. quinquefasciatus, 3b suratda anomal Cx görkezilýär. Bäş nematod liçinkasyna sebäp bolýar.
Subletal (LC50) dozalaryň biosurfaktantlaryň Culex quinquefasciatus liçinkalarynyň ösüşine täsiri. 40 × ulalanda adaty Cx-iň ýeňil mikroskopiýa şekili (a). quinquefasciatus (b) Anormal Cx. Bäş nematod liçinkasyna sebäp bolýar.
Häzirki gözlegde, bejerilen liçinkalary (4-nji surat) we termitleri (5-nji surat) gistologiki gözden geçirmek, garyn boşlugynyň azalmagy we myşsalaryň, epitel gatlaklarynyň we deriniň zeperlenmegi ýaly birnäçe näsazlygy ýüze çykardy. midgut. Gistologiýa bu işde ulanylýan biosurfaktantyň inhibitor işjeňliginiň mehanizmini ýüze çykardy.
Adaty bejerilmedik 4-nji instar Cx liçinkalarynyň histopatologiýasy. quinquefasciatus liçinkalary (gözegçilik: (a, b)) we biosurfaktant bilen bejerilýär (bejergisi: (c, d)). Oklar bejerilen içege epitelini (epi), ýadrolary (n) we myşsany (mu) görkezýär. Bar = 50 µm.
Adaty bejerilmedik O. semizliginiň gistopatologiýasy (gözegçilik: (a, b)) we bejerilen biosurfaktant (bejergi: (c, d)). Oklar degişlilikde içege epitelini (epi) we myşsany (mu) görkezýär. Bar = 50 µm.
Bu gözlegde, ECOSAR rhamnolipid biosurfaktant önümleriniň esasy öndürijilere (ýaşyl suwotulary), ilkinji sarp edijilere (suw balyklary) we ikinji derejeli sarp edijilere (balyklara) ýiti zäherliligini çaklamak üçin ulanyldy. Bu programma molekulýar gurluşa esaslanýan zäherliligi bahalandyrmak üçin çylşyrymly mukdar gurluşy-işjeňlik goşma modellerini ulanýar. Model, suw görnüşlerine maddalaryň ýiti we uzak möhletli zäherliligini hasaplamak üçin gurluş-işjeňlik (SAR) programma üpjünçiligini ulanýar. Hususan-da, 2-nji tablisada ortaça öldüriji konsentrasiýalar (LC50) we birnäçe görnüş üçin ortaça täsirli konsentrasiýalar (EC50) jemlenendir. Güman edilýän zäherlilik, himiki serişdeleriň klassifikasiýa we bellikleme ulgamynyň global derejede sazlaşdyrylan ulgamyny ulanyp dört derejä bölündi (3-nji tablisa).
Wektor bilen baglanyşykly kesellere gözegçilik etmek, esasanam çybynlaryň we Aedes çybynlarynyň ştamlary. Müsürliler, indi kyn iş 40,41,42,43,44,45,46. Piretroidler we organofosfatlar ýaly himiki taýdan bar bolan pestisidler birneme peýdaly bolsa-da, süýji keseli, köpeliş bozulmalary, newrologiki näsazlyklar, rak we dem alyş keselleri ýaly adam saglygyna uly howp döredýär. Mundan başga-da, wagtyň geçmegi bilen bu mör-möjekler olara garşy bolup biler13,43,48. Şeýlelik bilen, täsirli we ekologiýa taýdan arassa biologiki gözegçilik çäreleri çybynlara gözegçilik etmegiň has meşhur usuly bolar 49,50. Benelli51 çybyn wektorlaryna ir gözegçilik etmegiň şäher ýerlerinde has täsirli boljakdygyny öňe sürdi, ýöne oba ýerlerinde liçinkalary ulanmagy maslahat bermediler52. Tom et al 53, şeýle hem çybynlara ýetişmedik döwürlerinde gözegçilik etmegiň ygtybarly we ýönekeý strategiýa boljakdygyny öňe sürdi, sebäbi 54 gözegçilik agentlerine has duýgur.
Güýçli ştamm (Bioburfaktant önümçiligi) (Enterobacter cloacae SJ2) yzygiderli we geljegi uly netijeliligi görkezdi. Öňki gözlegimiz, Enterobacter cloacae SJ2-iň fiziki-himiki parametrleri ulanyp biosurfaktant önümçiligini optimallaşdyrýandygyny habar berdi26. Geçirilen gözleglere görä, potensial E. cloacae izolýasiýasy bilen biosurfaktant öndürmek üçin iň amatly şert 36 sagatlap inkubasiýa, 150 aýlawda agitasiýa, pH 7.5, 37 ° C, duzlulyk 1 ppt, uglerod çeşmesi hökmünde 2% glýukoza, 1% hamyrmaýa boldy. . ekstrakt 2,61 g / L biosurfaktant almak üçin azot çeşmesi hökmünde ulanyldy. Mundan başga-da, biosurfaktantlar TLC, FTIR we MALDI-TOF-MS ulanyp häsiýetlendirildi. Bu, rhamnolipidiň biosurfaktantdygyny tassyklady. Glikolipid biosurfaktantlary beýleki biosurfaktantlaryň iň intensiw öwrenilen synpydyr. Olar uglewod we lipid böleklerinden, esasan ýag kislotasy zynjyrlaryndan durýar. Glikolipidleriň arasynda esasy wekiller rhamnolipid we soforolipid56. Rhamnolipidlerde mono‐ ýa-da di - β - gidroksidekan kislotasy 57 bilen baglanyşykly iki sany ramnoz moýeti bar. Ramnolipidleriň lukmançylyk we derman senagatynda ulanylmagy, soňky döwürde pestisidler hökmünde 59 ulanylmagyna goşmaça 58-e ýetdi.
Biosurfaktantyň dem alyş sifonynyň gidrofob sebiti bilen täsiri suwuň stomatal boşlugyndan geçmegine mümkinçilik döredýär we şeýlelik bilen liçinkalaryň suw gurşawy bilen aragatnaşygyny ýokarlandyrýar. Biosurfaktantlaryň bolmagy, uzynlygy ýer ýüzüne ýakyn bolan trahiýa täsir edýär, bu bolsa liçinkalaryň ýüzüne süýşmegini we dem almagyny aňsatlaşdyrýar. Netijede suwuň üstki dartyş güýji azalýar. Liçinkalar suwuň ýüzüne birigip bilmeýändigi sebäpli, gidrostatik basyşy bozup, tankyň düýbüne düşýärler, netijede aşa köp energiýa harçlanýar we gark bolmak 38,60 bolýar. Şuňa meňzeş netijeler, Bacillus subtilis tarapyndan öndürilen biosurfaktant, Epestia kuehniella garşy liçinkalar işjeňligini görkezýän Ghribi61 tarapyndan gazanyldy. Edil şonuň ýaly, Cx-iň liçinkalar işjeňligi. Das we Mukherjee23, şeýle hem siklik lipopeptidleriň quinquefasciatus liçinkalaryna edýän täsirine baha berdiler.
Bu gözlegiň netijeleri, ramnolipid biosurfaktantlarynyň Cx-e garşy gurçuk işjeňligine degişlidir. Quinquefasciatus çybynlaryny öldürmek, öň çap edilen netijelere laýyk gelýär. Mysal üçin, Bacillus urugynyň dürli bakteriýalary tarapyndan öndürilen surfaktin esasly biosurfaktantlar ulanylýar. we Pseudomonas spp. Käbir irki habarlarda 64,65,66 Bacillus subtilis-den lipopeptid biosurfaktantlarynyň liçinkalary öldürýän işjeňligi habar berildi23. Deepali we başgalar. 63, Stenotropomonas maltofiliýadan izolirlenen rhamnolipid biosurfaktantynyň 10 mg / L konsentrasiýasynda güýçli liçisid işjeňliginiň bardygyny anyklady. Silwa we başgalar. 67 rhamnolipid biosurfaktantyň Ae garşy 1 g / L konsentrasiýasynda gurçuk işjeňligini habar berdi. Aedes aegypti. Kanakdande we başgalar. 68, Bacillus subtilis tarapyndan öndürilen lipopeptid biosurfaktantlarynyň Culex liçinkalarynda we Ewkaliptiň lipofil bölegi bolan termitlerde umumy ölüme sebäp bolandygyny habar berdi. Edil şonuň ýaly, Masendra we başgalar. Habar berlen 69 işçi garynja (Cryptotermes cynocephalus Light.) Lipofil n-heksan we E. çig ekstraktynyň EtOAc fraksiýalarynda 61,7% ölümi habar berildi.
Parthipan et al 70, Bacillus subtilis A1 we Pseudomonas stutzeri NA3 tarapyndan öndürilen lipopeptid biosurfaktantlarynyň gyzzyrma parazitiniň plazmodiniň wektory Anofel Stefensä garşy insektisid ulanylandygyny habar berdi. Liçinkalaryň we gurjaklaryň has uzak ýaşandyklaryny, ýumurtgalanma möhletleriniň has gysga bolandygyny, önelgesizdigini we biosurfaktantlaryň dürli konsentrasiýalary bilen bejerilende ömri gysga bolandygyny gördüler. B. subtilis biosurfaktant A1-iň syn edilen LC50 bahalary dürli liçinkalar üçin (ýagny I, II, III, IV we sahna gurjaklary) degişlilikde 3.58, 4.92, 5.37, 7.10 we 7.99 mg / L boldy. Deňeşdirilende, I-IV gurçuk basgançaklary we Pseudomonas stutzeri NA3-iň gurjak basgançaklary üçin biosurfaktantlar degişlilikde 2.61, 3.68, 4.48, 5.55 we 6.99 mg / L boldy. Diri galan liçinkalaryň we gurjaklaryň gijikdirilen fenologiýasy, insektisid bejergisiniň netijesinde ýüze çykýan möhüm fiziologiki we metabolik bozulmalaryň netijesi hasaplanýar.
Wickerhamomyces anomalus ştammy CCMA 0358, Aedes çybynlaryna garşy 100% larwisid işjeňligi bilen biosurfaktant öndürýär. aegypti 24 sagat aralyk 38 Silwa we başganyň habar bereninden has ýokarydy. Pseudomonas aeruginosa-dan günebakar ýagyny uglerod çeşmesi hökmünde ulanýan biosurfaktant, 48 sagadyň dowamynda liçinkalaryň 100% -ini öldürendigi görkezildi. Abinaýa we başg. Sentil-Natan we başg. ösümlik lagunlaryna sezewar bolan çybyn liçinkalarynyň 100% -iniň ölmek ähtimallygyna göz ýetirdi. 74.
Mör-möjekleriň biologiýasyna subletal täsirlerine baha bermek zyýankeşleri dolandyrmagyň toplumlaýyn programmalary üçin möhümdir, sebäbi subletal dozalar / konsentrasiýalar mör-möjekleri öldürmeýär, ýöne biologiki aýratynlyklaryny bozup geljek nesillerde mör-möjekleriň sanyny azaldyp biler10. Siqueira we al 75, 50-300 mg / ml aralygyndaky dürli konsentrasiýalarda synag edilende, rhamnolipid biosurfaktantynyň (300 mg / ml) doly larwisid işjeňligini (100% ölüm) synlady. “Aedes aegypti” ştamlarynyň uly basgançagy. Wagtyň ölüme we subletal konsentrasiýalaryň gurçuklaryň ýaşamagyna we ýüzmek işjeňligine edýän täsirini analiz etdiler. Mundan başga-da, biosurfaktantyň subletal konsentrasiýalaryna (meselem, 50 mg / mL we 100 mg / mL) 24–48 sagat täsir edenden soň ýüzmek tizliginiň peselendigini gördüler. Geljegi uly subletal rollary bolan zäherler, zyýanly mör-möjeklere köp zyýan bermekde has täsirli hasaplanýar.
Netijelerimiziň gistologiki gözlegleri, Enterobacter cloacae SJ2 tarapyndan öndürilen biosurfaktantlaryň çybyn (Cx. Quinquefasciatus) we termit (O. obesus) liçinkalarynyň dokumalaryny ep-esli üýtgedýändigini görkezýär. Şuňa meňzeş anomaliýalar An-da reyhan ýagynyň taýýarlanmagy bilen ýüze çykdy. gambiaes.s we An. arabica Ochola77 tarapyndan suratlandyryldy. Kamaraj we al.78 An-da şol bir morfologiki näsazlygy suratlandyrdy. Stefaniniň liçinkalary altyn nanobölejiklere sezewar edildi. Wasantha-Sriniwasan we başg. Aedes aegypti. Ragavendran we başgalar, çybynlaryň liçinkalarynyň ýerli Penisillium kömelekleriniň 500 mg / ml mysaly ekstrakty bilen bejerilendigini habar berdiler. Ae agyr gistologiki zeperleri görkezýär. aegypti we Cx. Ölüm derejesi 80. Öň Abinaýa we başg. Anyň dördünji instar liçinkalary öwrenildi. Stefensi we Ae. aegypti, B. licheniformis ekzopolisakaridleri bilen bejerilen Aedes aegypti-de köp sanly gistologik üýtgeşmeleri tapdy, şol sanda aşgazan düwünçegi, myşsalaryň atrofiýasy, nerw siminiň ganglýasynyň zeperlenmegi we tertipsizligi72. Ragavendran we başganyň pikiriçe, P. daleae myssial ekstrakty bilen bejergiden soň, synag edilen çybynlaryň midgut öýjükleri (4-nji instar liçinkalary) içegäniň lýumeniniň çişmegini, öýjükli mazmunyň azalmagyny we ýadro degenerasiýasyny görkezdi81. Echinacea ýapragy ekstrakty bilen bejerilen çybyn liçinkalarynda-da şol bir gistologiki üýtgemeler, bejerilen birleşmeleriň insektisid potensialyny görkezýär50.
ECOSAR programma üpjünçiliginiň ulanylmagy halkara derejesinde ykrar edildi82. Häzirki gözlegler, ECOSAR biosurfaktantlarynyň mikroelgalara (C. vulgaris), balyk we suw balyklaryna (D. magna) ýiti zäherliliginiň Birleşen Milletler Guramasy tarapyndan kesgitlenen “zäherlilik” kategoriýasyna degişlidigini görkezýär. ECOSAR ekotoksiklik modeli maddalaryň ýiti we uzak möhletli zäherliligini çaklamak üçin SAR we QSAR ulanýar we köplenç organiki hapalaýjy maddalaryň zäherliligini çaklamak üçin ulanylýar82,84.
Paraformaldegid, natriý fosfat buferi (pH 7.4) we bu gözlegde ulanylýan beýleki himiki maddalar Hindistanyň HiMedia Laboratories-den satyn alyndy.
Biosurfaktant önümçiligi ýeke-täk uglerod çeşmesi hökmünde 1% çig nebit bilen doldurylan 200 ml steril Bushnell Haas serişdesini öz içine alýan 500 ml Erlenmeyer çüýşelerinde geçirildi. Enterobacter cloacae SJ2 (1,4 × 104 CFU / ml) desgasy 7 günüň dowamynda 37 ° C, 200 aýlawda orbital sarsdyryjyda sanjym edildi we ösdürildi. Inkubasiýa döwründen soň, biosurfaktant 3400 × g derejesinde 4 minutda 20 minutda merkezden gaçyryş serişdesi bilen çykaryldy we emele gelen adatdan daşary tebigat barlag maksady bilen ulanyldy. Öň öwrenişimizden optimizasiýa proseduralary we biosurfaktantlary häsiýetlendirmek26.
Culex quinquefasciatus liçinkalary, Tamil Nadu (Hindistan), Palançipetaý, Deňiz biologiýasy boýunça ösen gözleg merkezinden (CAS) alyndy. Liçinkalar 27 ± 2 ° C deionlaşdyrylan suw bilen doldurylan plastik gaplarda we 12:12 fotoperiodda (ýagtylyk: garaňky) ösdürilip ýetişdirildi. Çybyn liçinkalaryna 10% glýukoza ergini berildi.
Culex quinquefasciatus liçinkalary açyk we goralmadyk septiki tanklarda tapyldy. Laboratoriýada liçinkalary kesgitlemek we medeniýeti kesgitlemek üçin standart klassifikasiýa görkezmelerini ulanyň85. Larwisid synaglary Bütindünýä saglygy goraýyş guramasynyň 86-nyň tekliplerine laýyklykda geçirildi. SH. Kwinquefasciatusyň dördünji instar liçinkalary, kuwwatynyň üçden iki bölegi bilen howa boşlugy bilen 25 ml we 50 ml toparlarda ýapyk turbalarda ýygnaldy. Biosurfaktant (0–50 mg / ml) her turba aýratynlykda goşuldy we 25 ° C derejesinde saklandy. Dolandyryş turbasy diňe distillendirilen suwy (50 ml) ulandy. Öli liçinkalar inkubasiýa döwründe (12–48 sagat) 87 ýüzmegiň alamatlaryny görkezmeýänler hasaplanýar. Deňlemäni ulanyp, gurçuk ölüminiň göterimini hasaplaň. (1) 88.
Odontotermitidae maşgalasy, Oba hojalyk şäherçesinde (Annamalaý uniwersiteti, Hindistan) çüýrän agaçlardan tapylan hindi termini Odontotermes obesusyny öz içine alýar. Zyýanlydygyny ýa-da ýokdugyny anyklamak üçin adaty proseduralary ulanyp, bu biosurfaktanty (0–50 mg / ml) barlaň. Laminar howa akymynda 30 minut guradylandan soň, Whatman kagyzynyň her zolagy 30, 40 ýa-da 50 mg / ml konsentrasiýasynda biosurfaktant bilen örtüldi. Öň örtülen we örtülmedik kagyz zolaklary Petri tagamynyň merkezinde synag edildi we deňeşdirildi. Her petri tagamynda otuz töweregi işjeň termit O. obesus bar. Gözegçilik we synag termitlerine iýmit çeşmesi hökmünde çyg kagyz berildi. Plhli tabaklar inkubasiýa döwründe otag temperaturasynda saklandy. Termitler 12, 24, 36 we 48 sagatdan soň öldi 89,90. Soňra 1-nji deňleme, dürli biosurfaktant konsentrasiýalarynda termit ölüminiň göterimini kesgitlemek üçin ulanyldy. (2).
Nusgalar buzda saklandy we 100 ml 0,1 M natriý fosfat buferi (pH 7.4) bolan mikrotublara gaplandy we Rajiw Gandi suw hojalygy merkeziniň (RGCA) Merkezi suw hojalygy patologiýa barlaghanasyna (CAPL) iberildi. Gistologiýa barlaghanasy, Sirkali, Maýiladuthurai. Goşmaça derňew üçin Tamil Nadu, Hindistan. Nusgalar derrew 4 ° paraformaldegidde 37 ° C-de 48 sagatlap düzedildi.
Fiksasiýa tapgyryndan soň, material 0,1 M natriý fosfat buferi (pH 7.4) bilen üç gezek ýuwuldy, etanolda basgançakly suwsuzlandyryldy we LEICA rezine 7 gün çümdi. Soňra madda rezin we polimerizator bilen doldurylan plastmassa galypda, 37 ° C çenli gyzdyrylan peçde, düzümindäki blok doly polimerlenýänçä goýulýar.
Polimerizasiýadan soň bloklar LEICA RM2235 mikrotomy (Rankin Biomedical Corporation 10,399 Enterprise Dr. Davisburg, MI 48,350, ABŞ) bilen 3 mm galyňlykda kesildi. Bölümler slaýdlarda toparlanandyr, her slaýdda alty bölüm bar. Slaýdlar otag temperaturasynda guradyldy, soňra gematoksilin bilen 7 minut boýaldy we 4 minutlap akýan suw bilen ýuwuldy. Mundan başga-da, eozin erginini derä 5 minut çalyň we akýan suw bilen 5 minut ýuwuň.
Uteiti zäherlilik dürli tropiki derejedäki suw jandarlaryny ulanmak bilen çak edilýärdi: 96 sagatlyk balyk LC50, 48 sagatlyk D. magna LC50 we 96 sagatlyk ýaşyl suwotulary EC50. Ramnolipid biosurfaktantlarynyň balyk we ýaşyl suwotulara zäherliligi ABŞ-nyň Daşky gurşawy goramak gullugy tarapyndan işlenip düzülen Windows üçin ECOSAR programma üpjünçiligi 2.2 wersiýasy arkaly bahalandyryldy. (Https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model internetde elýeterli).
Liçinkalar we antitermit işjeňligi üçin ähli synaglar üç nusgada geçirildi. Gurçuk we termit ölüm derejesi baradaky çyzykly regressiýa (dozanyň jogap üýtgeýjileriniň gündeligi) 95% ynam aralygy bilen orta ölüm howply konsentrasiýasyny (LC50) hasaplamak üçin ýerine ýetirildi we Prism® (8.0 wersiýa, GraphPad Software) Inc., konsentrasiýa jogap egrileri döredildi. ABŞ) 84, 91.
Häzirki gözleg, Enterobacter cloacae SJ2 tarapyndan çybynlaryň larwisid we antitermit serişdeleri hökmünde öndürilen mikrob biosurfaktantlarynyň potensialyny açýar we bu iş larwisid we antitermit hereketleriniň mehanizmlerine has gowy düşünmäge kömek eder. Biosurfaktantlar bilen bejerilen liçinkalaryň gistologiki gözlegleri iýmit siňdiriş ulgamyna, midgut, beýni korteksine we içege epitel öýjükleriniň giperplaziýasyna zeper ýetendigini görkezdi. Netijeler: Enterobacter cloacae SJ2 tarapyndan öndürilen rhamnolipid biosurfaktantyň antitermit we liçisid işjeňligine toksikologiki baha bermek, bu izolýasiýa çybynlaryň (Cx quinquefasciatus) we termitleriň (O. obesus) wektorly kesellerine gözegçilik etmek üçin potensial biopestisididigini ýüze çykardy. Biosurfaktantlaryň daşky gurşaw zäherliligine we olaryň daşky gurşawa ýetirýän täsirlerine düşünmeli. Bu gözleg, biosurfaktantlaryň daşky gurşaw töwekgelçiligini bahalandyrmak üçin ylmy esas berýär.
Iş wagty: Apr-09-2024