Sosna nematody sosna tokaý ekosistemalarynda uly ykdysady ýitgilere sebäp bolýandygy mälim bolan karantin göçýän endoparazitdir. Şu barlagda galogenleşdirilen indollaryň sosna nematodalaryna garşy nematosid işjeňligi we olaryň täsir mehanizmi gözden geçirilýär. 5-ýododindolyň we awermektiniň (oňyn gözegçilik) sosna nematodalaryna garşy nematosid işjeňligi pes konsentrasiýalarda (10 μg/ml) meňzeş we ýokary boldy. 5-ýododindol göwreliligi, köpeliş işjeňligini, embrion we liçinka ölümini we hereket hereketini azaldýar. Ligandlaryň oňurgasyzlara mahsus glutamat bilen berkidilen hlorid kanal reseptorlary bilen molekulýar özara täsirleri, awermektin ýaly 5-ýododindolyň reseptoryň işjeň ýerine berk baglanýandygy baradaky pikiri goldaýar. 5-ýododindol şeýle hem nematodalarda dürli fenotipik deformasiýalary, şol sanda organlaryň anomal çökmegi/kiçelmegi we wakuolizasiýanyň ýokarlanmagyny döretdi. Bu netijeler wakuollaryň nematod metilleşmesi arkaly ölümde rol oýnap biljekdigini görkezýär. Esasy zat, 5-ýodindol iki ösümlik görnüşine (kelem we turp) zäherli däldi. Şeýlelik bilen, bu gözleg, daşky gurşaw şertlerinde ýodoindolyň ulanylmagynyň sosna solmagynyň öňüni alyp biljekdigini görkezýär.
Sosna agajynyň nematody (Bursaphelenchus xylophilus) sosna agajynyň nematodyna (PWN) degişli bolup, ol göçüp barýan endoparazit nematody bolup, sosna tokaý ekosistemalaryna agyr ekologiýa zyýanyny ýetirýändigi mälim1. Sosna agajynyň nematodynyň döredýän sosna solgun keseli (PWD) Aziýa we Ýewropa ýaly birnäçe kontinentde çynlakaý meselä öwrülýär we Demirgazyk Amerikada nematody getirilen sosna görnüşlerini ýok edýär1,2. Sosna agaçlarynyň azalmagy uly ykdysady mesele bolup, onuň dünýä ýaýramagynyň mümkinçiligi alada döredýär3. Nematodanyň hüjümine iň köp aşakdaky sosna görnüşleri sezewar bolýar: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii we Pinus radiata4. Sosna nematody sosna agaçlaryny ýokuşandan soň birnäçe hepde ýa-da aýlaryň içinde öldürip bilýän çynlakaý keseldir. Mundan başga-da, sosna nematodynyň ýaýramagy dürli ekosistemalarda ýygy duş gelýär, şonuň üçin dowamly ýokuşma zynjyrlary döredildi1.
Burphalenchus xylophilus — Aphelenchoidea supermaşgalasyna we 102.5 kladasyna degişli karantin ösümlik-parazit nematody. Nematoda kömelekler bilen iýmitlenýär we sosna agaçlarynyň agaç dokumalarynda köpelýär, dört dürli liçinka tapgyryna geçýär: L1, L2, L3, L4 we ulular1,6. Iýmit ýetmezçiligi şertlerinde sosna nematody ýöriteleşdirilen liçinka tapgyryna — dauer tapgyryna geçýär, ol öz wektory — sosna gabyk böjegini (Monochamus alternatus) parazitlik edýär we sagdyn sosna agaçlaryna geçýär. Sagdyn eýelerde nematodalar ösümlik dokumalaryndan çalt geçýär we parenhim öýjükleri bilen iýmitlenýär, bu bolsa infeksiýadan soň bir ýylyň içinde birnäçe ýokary duýgurlyk reaksiýalaryna, sosnanyň solmagyna we ölümine getirýär1,7,8.
Sosna nematodlarynyň biologik gözegçiligi uzak wagtlap kynçylyk döredip, karantin çäreleri XX asyra degişli boldy. Sosna nematodlarynyň gözegçiliginiň häzirki strategiýalary, esasan, agaç tütetmek we nematosidleri agaç göwdelerine ýerleşdirmek ýaly himiki bejergileri öz içine alýar. Iň köp ulanylýan nematosidler awermektin maşgalasyna degişli awermektin we awermektin benzoatdyr. Bu gymmat himiki maddalar köp nematod görnüşlerine garşy örän täsirli we ekologiýa taýdan howpsuz hasaplanýar9. Şeýle-de bolsa, bu nematosidleriň gaýtalanmagy, Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella we awermektinlere garşylyk görkezýän birnäçe zyýankeşler, mysal üçin, Trichostrongylus colubriformis we Ostertagia circumcincta ýaly zyýankeşler üçin görkezilişi ýaly, çydamly sosna nematodlarynyň peýda bolmagyna getirjek saýlama basyşyny döretjekdigine garaşylýar10,11,12. Şonuň üçin, PVD-ni gözegçilikde saklamak üçin alternatiw, tygşytly we ekologiýa taýdan arassa çäreleri tapmak maksady bilen, garşylyk nusgalaryny yzygiderli öwrenmek we nematosidleri yzygiderli barlamak gerek. Soňky onýyllyklarda birnäçe awtorlar nematodlara garşy göreş serişdesi hökmünde ösümlik ekstraktlaryny, efir ýaglaryny we uçujy maddalary ulanmagy teklip etdiler13,14,15,16.
Biz ýakynda Caenorhabditis elegans 17-de indolyň, ýagny hüjreara we patyşalyklarara signal beriş molekulasynyň nematisid işjeňligini görkezdik. Indol mikrob ekologiýasynda giňden ýaýran hüjreara signal bolup, mikrob fiziologiýasyna, spora emele gelmegine, plazmid durnuklylygyna, dermanlara garşylyga, bioplenka emele gelmegine we wirulentlige täsir edýän köp sanly funksiýalary dolandyrýar 18, 19. Indolyň we onuň törämeleriniň beýleki patogen nematodlara garşy işjeňligi öwrenilmedi. Bu gözlegde biz 34 indolyň sosna nematodlaryna garşy nematisid işjeňligini öwrendik we iň güýçli 5-ýododindolyň täsir mehanizmini mikroskopiýa, wagt aralygy surata düşürmek we molekulýar dok tejribelerini ulanyp düşündirdik, şeýle hem tohumyň ösüş synagyny ulanyp ösümliklere zäherli täsirini bahaladyk.
Indolyň ýokary konsentrasiýalarynyň (>1.0 mM) nematodlara nematosid täsir edýändigi öň habar berildi17. B. xylophilus (garyşyk ýaşaýyş tapgyrlary) indol ýa-da 1 mM-de 33 dürli indol türewleri bilen bejerilenden soň, B. xylophilus-yň ölüm derejesi gözegçilik we bejergi alnan toparlardaky diri we öli nematodlary sanap ölçeldi. Bäş indol uly nematosid işjeňligini görkezdi; bejergi alynmadyk gözegçilik toparynyň ýaşaýyş derejesi 24 sagatdan soň 95 ± 7% boldy. Synag edilen 34 indolyň 1 mM-de 5-ýododindol we 4-fluorindol 100% ölüme sebäp boldy, 5,6-difluorindigo, metilindol-7-karboksilat we 7-ýododindol bolsa takmynan 50% ölüme sebäp boldy (1-nji tablisa).
5-ýodoidolyň sosna agajynyň nematodynyň wakuol emele gelmegine we metabolizmine täsiri. (A) Awermektiniň we 5-ýodoidolyň ululykdaky erkek nematodlaryna täsiri, (B) L1 tapgyrdaky nematod ýumurtgalary we (C) B. xylophilus-yň metabolizmi, (i) 0 sagatda wakuollar syn edilmedi, bejergi (ii) wakuolalara, (iii) köp sanly wakuolalaryň toplanmagyna, (iv) wakuolalaryň şişmegine, (v) wakuolalaryň birleşmegine we (vi) ägirt wakuolalaryň emele gelmegine getirdi. Gyzyl oklar wakuolalaryň şişmegini, gök oklar wakuolalaryň birleşmegini we gara oklar ägirt wakuolalary görkezýär. Ölçeg çyzygy = 50 μm.
Mundan başga-da, bu gözlegde sosna nematodlarynda metan sebäpli ölümiň yzygiderli prosesi hem beýan edildi (4C surat). Metanogen ölüm, görnükli sitoplazmatik wakuolalaryň toplanmagy bilen baglanyşykly öýjük ölüminiň apoptotik däl görnüşidir27. Sosna nematodlarynda syn edilen morfologiki kemçilikler metan sebäpli ölümiň mehanizmi bilen ýakyndan baglanyşykly bolup görünýär. Dürli wagtlarda geçirilen mikroskopik barlaglar 5-ýodoidolyň (0,1 mM) täsirinden 20 sagat soň ägirt wakuolalaryň emele gelendigini görkezdi. Mikroskopik wakuolalar 8 sagat bejergiden soň syn edildi we olaryň sany 12 sagatdan soň köpeldi. 14 sagatdan soň birnäçe uly wakuola syn edildi. 12-16 sagat bejergiden soň birnäçe birleşen wakuola aýdyň göründi, bu bolsa wakuolalaryň birleşmesiniň metanogen ölüm mehanizminiň esasydygyny görkezýär. 20 sagatdan soň, gurçukda birnäçe ägirt wakuola tapyldy. Bu gözegçilikler C. elegans-da metuozyň ilkinji hasabatyny görkezýär.
5-ýodindol bilen işlenen gurçuklarda wakuollaryň agregasiýasy we ýarylmagy hem syn edildi (5-nji surat), muny gurçuklaryň egilmegi we wakuollaryň daşky gurşawa çykmagy görkezýär. Wakuollaryň bozulmagy, adatça, çykanda L2 tarapyndan bitewi saklanýan ýumurtga gabygynyň membranasynda hem syn edildi (Goşmaça surat S2). Bu synlar wakuollaryň emele gelmegi we iriňleşmegi prosesinde suwuklygyň toplanmagynyň we osmoregulýasiýa bozulmasynyň, şeýle hem gaýtaryp bolýan öýjük zeperlenmesiniň (RCI) gatnaşygyny goldaýar (5-nji surat).
Ýodyň synlanan wakuol emele gelmegindäki roluny çaklamak bilen, biz natriý ýodidiniň (NaI) we kaliý ýodidiniň (KI) nematosid işjeňligini öwrendik. Şeýle-de bolsa, konsentrasiýalarda (0,1, 0,5 ýa-da 1 mM), olar nematodyň ýaşamagyna ýa-da wakuol emele gelmegine täsir etmedi (Goşmaça surat S5), emma 1 mM KI ýeňil nematosid täsirine eýe boldy. Beýleki tarapdan, 7-ýodindol (1 ýa-da 2 mM), 5-ýodindol ýaly, köp sanly wakuolalary we gurluş deformasiýalaryny döretdi (Goşmaça surat S6). Iki ýodoindol sosna nematodlarynda meňzeş fenotipik häsiýetleri görkezdi, NaI we KI bolsa görkezmedi. Gyzykly tarapy, indol synag edilen konsentrasiýalarda B. xylophilus-da wakuol emele gelmegine sebäp bolmady (maglumatlar görkezilmedi). Şeýlelik bilen, netijeler indol-ýod toplumynyň B. xylophilus-yň wakuollaşmagyna we metabolizmine jogapkärdigini tassyklady.
Nematisid işjeňligi üçin synagdan geçirilen indollaryň arasynda 5-ýodindol iň ýokary süýşme indeksine -5.89 kkal/mol deň boldy, ondan soň 7-ýodindol (-4.48 kkal/mol), 4-fluoroindol (-4.33) we indol (-4.03) gelýär (6-njy surat). 5-ýodindolyň leýsin 218 bilen güýçli esasy wodorod baglanyşygy onuň baglanyşygyny durnuklaşdyrýar, beýleki ähli indol türewleri bolsa serin 260 bilen gapdal zynjyrly wodorod baglanyşyklary arkaly baglanyşýar. Modelleşdirilen beýleki ýodoindollaryň arasynda 2-ýodinoindolyň baglanyşyk gymmaty -5,248 kkal/mol, bu bolsa onuň leýsin bilen esasy wodorod baglanyşygy bilen baglanyşyklydyr 218. Beýleki belli baglanyşyklara 3-ýodinoindol (-4,3 kkal/mol), 4-ýodinoindol (-4,0 kkal/mol) we 6-fluoroindol (-2,6 kkal/mol) girýär (Goşmaça surat S8). Galogenleşdirilen indollaryň köpüsi we indolyň özi, 5-ýododindol we 2-ýododindoldan başga, serin 260 bilen baglanyşyk emele getirýär. Leýsin 218 bilen wodorod baglanyşygynyň netijeli reseptor-ligand baglanyşygyny görkezýändigi, iwermektin üçin syn edilişi ýaly (Goşmaça surat S7), 5-ýododindolyň we 2-ýododindolyň, iwermektin ýaly, lýusin 218 arkaly GluCL reseptorynyň işjeň ýerine berk baglanýandygyny tassyklaýar (6-njy surat we Goşmaça surat S8). Bu baglanyşygyň GluCL toplumynyň açyk gözenek gurluşyny saklamak üçin zerurdygyny we GluCL reseptorynyň işjeň ýerine berk baglanmak arkaly 5-ýododindol, 2-ýododindol, awermektin we iwermektiniň ion kanalyny açyk saklaýandygyny we suwuklygyň siňmegine mümkinçilik berýändigini teklip edýäris.
Indolyň we galogenleşdirilen indolyň GluCL-e molekulýar baglanyşy. (A) indolyň, (B) 4-fluoroindolyň, (C) 7-ýodindolyň we (D) 5-ýodindol ligandlarynyň GluCL-iň işjeň merkezine baglanyş ugurlary. Belok lenta bilen görkezilýär we esasy wodorod baglanyşyklary sary nokatly çyzyklar hökmünde görkezilýär. (A′), (B′), (C′) we (D′) degişli ligandlaryň töweregindäki aminokislota galyndylary bilen özara täsirini görkezýär we gapdal zynjyrly wodorod baglanyşyklary gülgüne nokatly ok bilen görkezilýär.
5-ýodindolyň kelem we turp tohumlarynyň ösüp çykmagyna zäherli täsirini bahalandyrmak üçin tejribeler geçirildi. 5-ýodindol (0,05 ýa-da 0,1 mM) ýa-da awermektin (10 μg/ml) başlangyç ösüp çykmagyna we ösümlikleriň ösüp çykmagyna az täsir etdi ýa-da hiç hili täsir etmedi (7-nji surat). Mundan başga-da, işlenilmedik gözegçilik tohumlarynyň ösüp çykmagynyň tizligi bilen 5-ýodindol ýa-da awermektin bilen işlenilen tohumlaryň arasynda düýpli tapawut tapylmady. 5-ýodindolyň 1 mM (aktiw konsentrasiýasynyň 10 esse) gapdal kökleriniň ösüşini birneme gijikdirse-de, köküň uzalmagyna we emele gelen gapdal kökleriň sanyna täsiri az boldy. Bu netijeler 5-ýodindolyň ösümlik öýjükleri üçin zäherli däldigini we öwrenilen konsentrasiýalarda ösümlikleriň ösüş proseslerine päsgel bermeýändigini görkezýär.
5-ýodoidolyň tohumyň çişmegine täsiri. Awermektin ýa-da 5-ýodoidol goşulan ýa-da goşulmadyk Murashige we Skoog agar gurşawynda B. oleracea we R. raphanistrum tohumlarynyň çişmegi, çişmegi we gapdal kök urmagy. Çişmegi 22°C-de 3 günlük inkubasiýadan soň hasaba alyndy.
Bu gözlegde indollaryň nematodlary öldürmeginiň birnäçe ýagdaýy habar berilýär. Iň esasysy, bu sosna iňňelerinde ýodoindolyň metilleşmesini (kiçi wakuolalaryň toplanmagy netijesinde ýüze çykýan we kem-kemden ägirt wakuolalara birleşýän, ahyrsoňy membrananyň ýyrtylmagyna we ölümine sebäp bolýan proses) döredýän ilkinji habardyr, ýodoindol bolsa söwda nematosid awermektiniňki ýaly möhüm nematosid häsiýetlerini görkezýär.
Indollaryň prokariotlarda we eukariotlarda biofilmiň inhibisiýasy/döremegi, bakteriýalaryň ýaşamagy we patogenligi ýaly köp sanly signal funksiýalaryny ýerine ýetirýändigi barada ozal habar berlipdi19,32,33,34. Soňky döwürde galogenleşdirilen indollaryň, indol alkaloidleriniň we ýarym sintetiki indol türewleriniň mümkin bolan terapewtiki täsirleri giň ylmy gyzyklanma döretdi35,36,37. Mysal üçin, galogenleşdirilen indollaryň dowamly Escherichia coli we Staphylococcus aureus öýjüklerini öldürýändigi görkezildi37. Mundan başga-da, galogenleşdirilen indollaryň beýleki görnüşlere, uruglara we patyşalyklara garşy netijeliligini öwrenmek ylmy taýdan gyzyklydyr we bu gözleg bu maksada ýetmek üçin ädilen ädimdir.
Bu ýerde biz C. elegans-da 5-ýodindol sebäpli ölüm howpunyň gaýtdyp bolýan öýjük zeperlenmesine (RCI) we metilleşme esaslanyp mehanizmini teklip edýäris (4C we 5-nji suratlar). Şişme we wakuolýar degenerasiýa ýaly ödemli üýtgeşmeler RCI-niň we metilleşme alamatlary bolup, sitoplazmada ägirt wakuolalar hökmünde ýüze çykýar48,49. RCI ATP önümçiligini azaltmak, ATFaza nasosynyň işlemezligine sebäp bolmak ýa-da öýjük membranalaryny bozmak we Na+, Ca2+ we suwuň çalt akymyna sebäp bolmak arkaly energiýa önümçiligine päsgel berýär50,51,52. Sitoplazmanyň içindäki wakuolalar haýwan öýjüklerinde Ca2+ we suwuň akymy sebäpli sitoplazmada suwuklygyň toplanmagy netijesinde ýüze çykýar53. Gyzykly tarapy, eger zyýan wagtlaýyn bolsa we öýjükler belli bir wagtlap ATF öndürip başlasa, öýjükleriň bu zeperlenme mehanizmi yzyna gaýtarylyp bilner, ýöne zeperlenme dowam etse ýa-da erbetleşse, öýjükler ölýär.54 Biziň synlamalarymyz 5-ýodoidol bilen bejerilen nematodalaryň stress şertlerine sezewar bolandan soň kadaly biosintezi dikeltmäge ukyply däldigini görkezýär.
B. xylophilus-da 5-ýodoindol tarapyndan induksiýa edilen metilleşme fenotipi ýodyň bolmagy we onuň molekulýar paýlanyşy bilen baglanyşykly bolup biler, sebäbi 7-ýodoindol B. xylophilus-a 5-ýodoindoldan has az tormozlaýjy täsir etdi (1-nji tablisa we goşmaça surat S6). Bu netijeler Maltese we beýlekileriň (2014) geçiren barlaglary bilen bölekleýin gabat gelýär, olar indoldaky piridil azot böleginiň para-dan meta-pozisiýa geçirilmeginiň U251 öýjüklerinde wakuolizasiýany, ösüşiň tormozlanmagyny we sitotoksikligi ýok edendigini habar berdiler, bu bolsa molekulanyň belokdaky belli bir işjeň ýer bilen özara täsiriniň möhümdigini görkezýär27,44,45. Bu barlagda syn edilen indol ýa-da galogenleşdirilen indollaryň we GluCL reseptorlarynyň arasyndaky özara täsirler hem bu pikiri goldaýar, sebäbi 5- we 2-ýodoindolyň barlanan beýleki indollardan has güýçli GluCL reseptorlaryna baglanýandygy anyklandy (6-njy surat we goşmaça surat S8). Indolyň ikinji ýa-da bäşinji pozisiýasyndaky ýodyň GluCL reseptorynyň leýsin 218 bilen esasy wodorod baglanyşyklary arkaly baglanyşýandygy, beýleki galogenleşdirilen indollaryň we indolyň özi bolsa serin 260 bilen gowşak zynjyrly wodorod baglanyşyklaryny emele getirýändigi anyklandy (6-njy surat). Şonuň üçin biz galogeniň ýerleşmeginiň wakuol degenerasiýasynyň induksiýasynda möhüm rol oýnaýandygyny, 5-ýododindolyň berk baglanyşynyň bolsa ion kanalyny açyk saklaýandygyny we şeýdip suwuklygyň çalt gelmegine we wakuolyň ýyrtylmagyna mümkinçilik berýändigini çaklaýarys. Şeýle-de bolsa, 5-ýododindolyň täsiriniň jikme-jik mehanizmi heniz kesgitlenmeli.
5-ýodindolyň amaly ulanylyşyndan öň, onuň ösümliklere zäherli täsiri seljerilmelidir. Tohumlaryň ösüp çykmagy boýunça geçiren tejribelerimiz 5-ýodindolyň öwrenilen konsentrasiýalarda tohumlaryň ösüp çykmagyna ýa-da soňraky ösüş proseslerine hiç hili ýaramaz täsir etmeýändigini görkezdi (7-nji surat). Şeýlelik bilen, bu gözleg sosna nematodlarynyň sosna agaçlaryna zyýanlylygyny gözegçilikde saklamak üçin ekologiýa gurşawynda 5-ýodindolyň ulanylmagy üçin esas döredýär.
Öňki hasabatlar indol esasyndaky terapiýanyň antibiotiklere garşylyk we rak keseliniň ösmegi meselesini çözmek üçin mümkin bolan çemeleşmedigini görkezdi55. Mundan başga-da, indollaryň antibakterial, rak garşy, antioksidant, iltihap garşy, diabet garşy, wirusa garşy, proliferasiýa garşy we tuberkulýoz garşy täsirleri bar we derman serişdelerini işläp düzmek üçin geljegi uly esas bolup hyzmat edip biler56,57. Bu gözleg ilkinji gezek ýodyň parazitlere garşy we anthelmintic serişde hökmünde ulanylmagynyň mümkindigini görkezýär.
Awermektin üç onýyllyk mundan ozal açylyp, 2015-nji ýylda Nobel baýragyna mynasyp boldy we onuň anthelmintic serişde hökmünde ulanylyşy henizem işjeň dowam edýär. Şeýle-de bolsa, nematodlarda we mör-möjek zyýankeşlerinde awermektinlere garşy durnuklylygyň çalt ösmegi sebäpli, sosna agaçlarynda PWN infeksiýasyny gözegçilikde saklamak üçin alternatiw, arzan we ekologiýa taýdan arassa strategiýa zerurdyr. Bu gözlegde şeýle hem 5-ýodindolyň sosna nematodlaryny nähili öldürýändigi we 5-ýodindolyň ösümlik öýjükleri üçin pes zäherliligi barada habar berilýär, bu bolsa onuň geljekde täjirçilik ulanylyşy üçin gowy mümkinçilikleri açýar.
Ähli tejribeler Koreýanyň Gýeongsan şäherindäki Ýeungnam uniwersitetiniň Etika komiteti tarapyndan tassyklanyldy we usullar Ýeungnam uniwersitetiniň Etika komitetiniň görkezmelerine laýyklykda ýerine ýetirildi.
Ýumurtga inkubasiýa tejribeleri bellenen usullar arkaly geçirildi43. Çykyş tizligini (HR) bahalandyrmak üçin, 1 günlük uly nematodalar (takmynan 100 dişi we 100 erkek) kömelek saklaýan Petri gaplaryna geçirildi we 24 sagatlap ösmegine rugsat berildi. Soňra ýumurtgalar bölünip alyndy we steril distillenen suwda suspenziýa hökmünde 5-ýodindol (0,05 mM we 0,1 mM) ýa-da awermektin (10 μg/ml) bilen işlenildi. Bu suspenziýalar (500 μl; takmynan 100 ýumurtga) 24 guýulyk dokuma medeniýet plastinkasynyň guýularyna geçirildi we 22 °C-de inkubasiýa edildi. L2 sany 24 sagat inkubasiýadan soň edildi, ýöne inçe platina sim bilen höweslendirilende öýjükler hereket etmese, öli hasaplandy. Bu tejribe iki tapgyrda geçirildi, her biri alty gezek gaýtalandy. Iki tejribeden alnan maglumatlar birleşdirildi we görkezildi. HR-iň göterimi aşakdaky ýaly hasaplanýar:
Liçinkalaryň ölüm derejesi öň işlenip düzülen usullar arkaly bahalandyryldy. Nematod ýumurtgalary ýygnaldy we embrionlar steril distillenen suwda çykarylyp, L2 tapgyrly liçinkalary öndürmek arkaly sinhronlaşdyryldy. Sinhronlaşdyrylan liçinkalar (takmynan 500 nematod) 5-ýodindol (0,05 mM we 0,1 mM) ýa-da awermektin (10 μg/ml) bilen işlenildi we B. cinerea Petri plastinkalarynda ösdürilip ýetişdirildi. 22 °C-de 48 sagat inkubasiýadan soň, nematodlar steril distillenen suwda ýygnaldy we L2, L3 we L4 tapgyrlarynyň bardygy barlandy. L3 we L4 tapgyrlarynyň bardygy liçinkalaryň özgerişini görkezdi, L2 tapgyrynyň bardygy bolsa özgerişiň ýokdugyny görkezdi. Suratlar iRiS™ sanly öýjük şekil ulgamy arkaly alyndy. Bu tejribe iki tapgyrda geçirildi, her biri alty gezek gaýtalandy. Iki tejribeden alnan maglumatlar birleşdirildi we görkezildi.
5-ýodindolyň we awermektiniň tohumlara zäherliligi Murashige we Skoog agar plastinkalarynda ösüş synaglary arkaly bahalandyryldy.62 B. oleracea we R. raphanistrum tohumlary ilki bir gün steril distillenen suwda çümdürildi, 1 ml 100% etanol bilen ýuwuldy, 1 ml 50% täjirçilik agardyjysy (3% natriý gipohlorit) bilen 15 minut sterilleşdirildi we 1 ml steril suw bilen bäş gezek ýuwuldy. Soňra sterilleşdirilen tohumlar 0,86 g/l (0,2X) Murashige we Skoog gurşawyndan we 0,7% bakteriologiki agardan 5-ýodindol ýa-da awermektin goşulan ýa-da goşulmadyk ösüş agar plastinkalaryna basyldy. Soňra plastinkalar 22 °C-de inkubasiýa edildi we 3 gün inkubasiýadan soň suratlar alyndy. Bu synag iki tapgyrda geçirildi, olaryň her biri alty gezek gaýtalandy.
Ýerleşdirilen wagty: 2025-nji ýylyň 26-njy fewraly